Zavod za kliničku mikrobiologiju i hospitalne infekcije - postupci uzimanja, dostava i pohrana uzoraka

Obrisak ždrijela

1. progutati slinu
2. otvoriti usta
3. špatulom lagano pritisnuti bazu jezika
4. obrisati tonzile, nepčane lukove, izbjegavajući bazu jezika, bukalnu sluznicu kako se uzorak ne bi kontaminirao fiziološkom florom usne šupljine
5. koristiti bris od dakrona ili kalcij alginata
6. uzorak odmah odnijeti u laboratorij, ako nije moguće pohraniti obrisak u hladnjak
   opaska: moguće je brzim imunoenzimskim testom izravno detektirati beta hemolitički streptokok iz obriska ždrijela. Rezultati dostupni za 15 min. Ako je test negativan, uzima se dodatno  obrisak za uzgoj, zbog niske osjetljivosti testa
7. uzgoj obriska ždrijela na Neisseria gonorrhoeae radi se na zahtjev
8. kliconoštvo na meticilin rezistentni Staphylococcus aureus (MRSA) radi se po dogovoru za stacionarne bolesnike ili u skladu sa prihvaćenim preporukama

1. glavu držati ravno
2. bris staviti 1 cm najprije u jednu, potom u drugu nosnicu, lagano rotirati 10-15 sekundi kako bi se upio sekret iz prednjih nosnih hodnika
3. uzorak odmah odnijeti u laboratorij ili ga držati na sobnoj temperaturi
4. Obrisak nosa primarno se koristi radi otkrivanja kliconoštva stafilokokom, meticilin rezistentnim Staphylococcus aureus-om i ß hemolitičkim streptokokom.

1. glavu držati ravno, podignuti lagano vrh nosa, da se nosni hodnik izravna
2. obrisak lagano gurnuti do kraja nosnog hodnika, lagano zarotirati da se upije sekret
3. uzorak se odmah šalje u laboratorij ili ga držati na sobnoj temperaturi
4. Obrisci nazofarinksa primarno se uzimaju radi dokazivanja  meningokoka, uzročnika difterije i pertusisa. Obrisak se stavlja u transportni medij.

1. Aspirat sinusa je ciljani uzorak kod sumnje na sinusitis
2. Uzorak odmah poslati u laboratorij, ako nije moguće, ostaviti na sobnoj temperaturi u podlozi za anaerobe.

Uho
Obrisak vanjskog uha - zvukovoda

1. prvim brisom namočenim u sterilnu fiziološku otopinu dekontaminirati područje
2. drugim brisom uzeti uzorak
3. odmah transportirati u laboratorij, ako nije moguće, pohraniti u hladnjak.
4. Obrisak se uzima pri sumnji na infekciju vanjskog uha ili zvukovoda, ne pri sumnji na infekciju srednjeg uha.

Srednje uho

1. ušku lagano potegnuti unazad i izravnati vanjski slušni kanal
2. dekontaminirati područje vanjskog slušnog kanala brisom namočenim u sterilnu fiziološku otopinu
3. sadržaj srednjeg uha uzima se aspiracijom pomoću igle i brizgaljke
4. obrisak je moguć samo kod rupture bubnjića
5. odmah dostaviti u laboratorij, ako nije moguće držati na sobnoj temperaturi ili u transportnom mediju za anaerobe
6. Obriskom nazofarinksa ne može se odrediti uzročnik upale srednjeg uha

Oko
Spojnica oka - konjunktiva

1. brisom namočenim u sterilnu fiziološku otopinu prebrisati konjunktivu oka svakog zasebno
2. uzorak odmah poslati u laboratorij, ako nije moguće držati ga na sobnoj temperaturi
3. kod traume oka obriske dostaviti odmah ili pohraniti na sobnoj temperaturi u hranjivoj tekućoj podlozi
4. pri sumnji na infekciju klamidijom obrisak konjunktive gornje vjeđe uzeti brisem i  pohraniti u transportni medij za klamidije
5. precizno ispuniti uputnicu o dijagnozi, osnovnoj bolesti, antimikrobnoj terapiji, te o vremenu kada je posljednji put primjenjena lokalna antimikrobna terapija.

Rožnica

1. ciljani uzorak je strugotina korneje ili obrisak ulkusa
2. odmah poslati u laboratorij, u transportnom mediju za anaerobe
3. strugotine korneje za dijagnostiku Acantamoebe poslati u parasitološki laboratorij Zavoda za javno zdravstvo Republike Hrvatske,  Rockeffelereova 2
4. strugotine korneje za dijagnostiku herpes infekcije poslati u virološki laboratorij Zavoda za javno zdravstvo Republike Hrvatske, Rockeffelereova 2 

Iskašljaj

1. Iskašljaj ili sputum je ciljani uzorak za određivanje uzročnika bakterijske pneumonije samo pod uvjetom da se radi o ekspektoriranom sputumu. Kvaliteta iskašljaja određuje se mikroskopski na temelju odnosa epitelnih stanica i polimorfonukleara.
   Ekspektorirani iskašljaj, se uzima nakon toalete usne šupljine sterilnom fiziološkom otopinom, a kašalj se inducira inhalacijom ekspektoransa pomoću nebulisatora
2. bolesnika treba nagnuti prema naprijed, podražiti ga na iskašljavanje iz dubine, tj. da se dobije uzorak iz donjeg dišnog sustava.
3. uzima se prvi jutarnji iskašljaj nakon toalete usne šupljine sterilnom fiziološkom otopinom
4. iskašljati se u sterilnu posudicu
5. ako bolesnik ima protezu; prije iskašljavanja potrebno ju je izvaditi
6. uzorak odmah poslati u laboratorij, ili ga pohraniti u hladionik
7. uzimanje iskašljaja tri dana za redom povećava osjetljivost metode u otkrivanju uzročnika pneumonije
8. na uputnici nužno naznačiti da li se traži bakteriološka, mikološka pretraga ili M. tuberculosis

1. uzorak se uzima tijekom bronhoskopije, pomoću sterilnog bronhoskopa, zahvat se obavlja u anesteziji tako da se sterilnom fiziološkom otopinom ispiru donji dijelovi dišnog sustava, bronhi, bronhioli, alveole te se ista tekućina aspirira i stavlja u sterilne posudice. Može se uzeti ciljani uzorak u zaštićenom kateteru, kako bi se izbjegla sekundarna kontaminacija fiziološkom florom gornjeg dišnog sustava
2. uzorak odmah odnijeti u laboratorij
3. nedostatak ove metode je da anestetik može inhibirati rast bakterija

1. tijekom bronhoskopije četkicom (brush) se uđe u donje dijelove dišnog sustava, četkicom se pokupi uzorak ili je uzorak dio četkice koja se stavi u sterilnu fiziološku otopinu
2. uzorak odmah odnijeti u laboratorij
3. primjena bronhoskopije samo u dijagnostičke svrhe se ne preporučuje. Za taj postupak mora biti postavljena stroga indikacija

1. aspirat traheje je ciljani uzorak u dijagnozi pneumonije, uz komplementarne uzorke krvi za hemokulturu
2. moguće je uzeti u intubiranih bolesnika ili sa traheostomom
3. pažljivo uvesti sterilni kateter u traheju
4. aspirirati sadržaj iz traheje pomoću brizgaljke od 20 mL
5. izvaditi kateter i aspirat staviti u sterilnu posudicu
6. uzorak odmah odnijeti u laboratorij
7. s obzirom da traheostoma može biti kolonizirana gram - bakterijama, prisutnost istih u uzgoju, ne mora predstavljati uzročnika upale pluća. Stoga je nužno poslati više uzoraka uz naznaku koji je uzet prvi, drugi, prije toalete stome ili nakon nje.

1. oprati vanjsko spolovilo sapunom i isprati vodom
2. prvi mlaz urina ispustiti u toalet, uzeti drugi mlaz prvog jutarnjeg urina u sterilnu epruvetu, ili barem tri sata zadržanog urina u mokraćnom mjehuru
3. prilikom zatvaranja i dostave posudice ili epruvete paziti da ne dođe do kontaminacije
4. uzorak odmah odnijeti u laboratorij. Ako to nije moguće pohraniti u hladnjak do 24 sata
5. 24-satni urin je neprihvatljiv za uzgoj
6. u male djece uzima se urin iz vrećice, koja se stavlja nakon pažljive toalete spolovila. Iznimno se može uzeti urin suprapubičnom punkcijom
7. u uroloških bolesnika na uputnici precizno naznačiti vrstu urološke operacije, i način derivacije urina, te da li je i na koji način promijenjena normalna dinamika pražnjenja  urina iz mokraćnog sustava
8. ako se radi o ureterokutanoj stomi, urin iz vrećice nije prihvatljiv. Potrebno je dezinficirati otvor stome 70% alkoholom ili povidon-jodidom, aseptički uvesti kateter u stomu te uzeti uzorak urina u sterilnu posudicu

1. 70% alkoholom dezinficirati mjesto na kateteru. Iglom i brizgaljkom aspirirati 5-10mL urina
2. prebaciti u sterilnu epruvetu
3. urin iz vrećice nije prihvatljiv za uzgoj
4. vrh urinarnog katetera je neprihvatljiv za uzgoj
5. trajni kateter se unutar 48-72 sata kolonizira bakterijama. Stoga je bitno na uputnici precizno naznačiti način uzimanja uzorka, vrstu katetera i datum postavljanja katetera
6. urin poslati odmah u laboratorij, ako nije moguće pohraniti u hladnjak do 24 sata

1. briseve uzima specijalist ginekolog, pomoću spekula bez lubrikanta
2. jednim brisom ukloni se sa cerviksa vaginalni sekret i sluz
3. drugim brisom uđe se u endocervikalni kanal, rotirajući smjerom suprotnim od kazaljke na satu. Oba brisa poslati na obradu naznačiti koji je prvi, koji drugi
4. uzorak odmah poslati u laboratorij
5. za klamidije ponoviti isti postupak, ali upotrijebiti žičani bris kojim se uzme obrisak endocerviksa
6. poslati u transportnom mediju u laboratorij.
7. obrisak vagine nije ciljani uzorak, jer klamidije nisu prisutne u pločastom epitelu vagine. Ciljno mjesto obitavanja klamidija je cilindrični epitel
   endocerviksa, konjunktive, uretre
8. za Mycoplasma hominis i Ureaplasma urealyiticum bris se uzima na klasičan način, šalje odmah u laboratorij ili se pohranjuje u transportnom mediju u hladnjaku pri +4˚ C do dostave u laboratorij
9. za otkrivanje Neisseria gonorrhoeae ciljani uzorci su obrisci endocerviksa i anusa. Obrisak treba odmah poslati u laboratorij u transportnom mediju, a na uputnici precizno označiti vrstu uzorka i pretragu na Neisseria gonorrhoeae

1. uzorke plodne vode, tkiva, implantata, abdominalne tekućine poslati u sterilnoj posudici i/ili u bujonu. Potrebne su sterilne tehnike uzimanja uzoraka
2. dostava odmah u sterilnoj posudici, a  pohrana u termostatu pri 37˚ C do 6 sati u hranjivoj podlozi

1. za otkrivanje kliconoštva streptokokom grupe B u trudnica, preporuča se uzeti obrisak introitusa vagine i /ili područja anusa
2. obrisci vagine rijetko se uzimaju u rutinskom radu zbog prisutnog velikog broja komenzala, koji otežavaju interpretaciju nalaza.
3. ciljano iz obriska vagine treba tražiti Trichomonas vaginalis, Candida spp.( sistemske gljive)

1. obrisak se uzima najmanje 1 sat nakon što bolesnik nije mokrio
2. vanjsko ušće uretre oprati sapunom i isprati vodom
3. tankim  žičanim brisom ući u ušće uretre 1 do 2 cm, rotirajući obrnuto od smjera kazaljke na satu. Ako postoji sekret, brisom pokupiti sekret ušća  uretre.
4. uzorak odmah poslati u laboratorij
5. obrisak uretre na mikoplazme, ureaplazme i klamidije treba uzeti najmanje 1 sat nakon što bolesnik nije mokrio
6. obrisak odmah poslati u laboratorij. Ako to nije moguće, u transportnoj podlozi držati u hladnjaku do 12 sati.
7. mikoplazme i ureaplazme mogu se dokazati i u prvom mlazu prvog jutarnjeg urina
8. za Neisseria gonorrhoeae, obrisak staviti u transportni medij, na sobnu temperaturu. Na uputnici precizno naznačiti vrstu uzorka i pretragu koja se traži. Koristiti briseve od dakrona, jer brisevi od kalcij alginata i pamuka inhibiraju rast navedenih mikroba. 

   Ako se traži obrada na bakterije, ureaplazme i mikoplazme, klamidije za svaku vrstu pretrage mora se uzeti poseban bris. Koliko pretraga, toliko uzoraka.

1. povući nabor prepucija
2. oprati vanjsko spolovilo sapunom i isprati vodom
3. sakupiti ejakulat u sterilnu posudicu
4. poslati odmah u laboratorij, ako nije moguće držati ga na sobnoj temperaturi
5. uz ejakulat, treba poslati uzorak urina prije i nakon ejakulacije 

1. tijekom gastroskopije uzima se 2-3 uzorka tkiva (bioptata-punch biopsija) sa promijenjenih mjesta na sluznici
2. bioptat se stavlja u sterilnu fiziološku otopinu ili transportni Brucella bujon
3. uzorci sluznice se odmah šalju u laboratorij 

Sadržaj duodenuma uzima se tijekom endoskopskog pregleda ili pomoću kapsule (ciljana pretraga na lamblije)

1. uzorak veličine manjeg oraha uzima se kod kliničke slike akutnog proljeva i za kontrolu kliconoštva (Salmonella, Shigella, enteropatogena E.coli, Campylobacter,Yersinia)
2. dio proljevaste stolice staviti u čistu posudicu, ne mora biti sterilna
3. uzorak odmah odnijeti u laboratorij, ako nije moguće, pohraniti u hladnjak
4. ciljanu obradu na toksin Clostridium difficile iz stolice treba raditi ako bolesnik ima više od 5 stolica tijekom 24 sata i ako je na dugotrajnoj antimikrobnoj terapiji
5. na uputnici navesti vrstu antibiotika i duljinu primjene
6. uzorak odmah poslati u laboratorij, ili ga pohraniti u hladnjak.

Uzima se pri utvrđivanju kliconoštva Salmonella, Shigella spp, Campylobacte spp, gonoreje, kod bolesnika i osoba  kod kojih nije moguće dobiti uzorak stolice.
Uobičajeno se radi tijekom epidemije. Obrisak rektuma je manje vrijedan od uzorka stolice. 

1. u čistu posudu uzme se uzorak stolice kao i za bakteriološku obradu
2. potrebno je poslati tri uzorka tri dana za redom jer se jajašca parazita nepravilno izlučuju stolicom
3. pretraga se može napraviti tek nakon što je prošlo 5 dana od primjene barijeve kaše ili mineralnih ulja ili prije radiološke obrade probavnog sustava
4. uzorak odmah poslati u laboratorij ili ga pohraniti u hladnjak 

1. pretraga se obavlja u mikrobiološkom laboratoriju O.B. Sveti Duh
2. potrebno je telefonski naručiti pretragu
3. priprema bolesnika za provokaciju uključuje jutro uoči pretrage popiti 1 tabletu Dulcolax-a (oko 05 h)
4. zatim doručkovati, doći u 8 sati u laboratorij gdje se popiju još tri žlice gorke soli
5. potrebno je dati tri uzorka vodenaste stolice, koje se odmah mikroskopiraju.

1. nakon buđenja, bez prethodnog  pranja, zalijepiti samoljepljivu prozirnu traku na anus, čvrsto pritisnuti, odlijepiti i staviti na predmetno staklo
2. odmah odnijeti u laboratorij 

1. uzorak je vodenasta stolica, koju treba uzeti odmah nakon početnih simptoma infekcije
2. odmah se šalje u laboratorij ili se pohranjuje u hladnjak.

Indikacija za uzimanje krvi za hemokulture je febrilno stanje. Potrebno je pratiti temperaturnu krivulju bolesnika i kod litičkog pada temperature uzeti krv prema indikacijama: to su 3 hemokulture tijekom 24 sata pri sepsi ili 4-6 uzoraka kod endokarditisa ili vrućice nepoznate etiologije.

1. dezinficirati čep bočice 70% izopropilnim alkoholom, sačekati 1 min da ispari alkohol
2. ispalpirati venu
3. dezinficirati mjesto venepunkcije:
   -70% izopropilnim alkoholom u koncentričnim krugovima od sredine prema periferiji
   -ponovno palpirati venu samo sa sterilnim rukavicama
   -uzeti volumen krvi od 2do 5 ml za djecu, 10 do 20 ml za odrasle, najmanje dva seta hemokultura (set je hemokultura uzeta s jednog mjesta venepunkcije, za aerobnu i anaerobnu kultivaciju ovisno o indikaciji
4. obično se uzimaju po tri seta hemokultura,u posebnim uvjetima i tri seta s tri različita mjesta venepunkcije (kod akutnog i subakutnog endokarditisa) ili pri sumnji na primarnu infekciju krvotoka kao posljedica primjene centralnog vaskularnog katetera
5. hemokulture odmah poslati u laboratorij, ako nije moguće staviti u termostat ili ostaviti na sobnoj temperaturi. Ne stavljati u hladnjak
6. uz hemokulturu može se poslati i vrh centralnog vaskularnog katetera. Najprije treba kožu dezinficirati alkoholom oko mjesta izlazišta katetera. U strogo aseptičnim uvjetima izvaditi kateter i poslati distalnih 5 cm u sterilnoj posudici u laboratorij odmah, bez tekuće podloge.

* od važnosti je i precizno ispunjena uputnica, uz podatke o ranijoj antimikrobnoj terapiji i mjestu uzimanja krvi  (periferija i/ili centralna vena), uputnoj dijagnozi

1. likvor aspirirati nakon dekontaminacije kože 70 % alkoholom i /ili povidon-jodidom lumbalnom punkcijom na nivou L3-L4, L4-L5 kralješka u strogo aseptičnim uvjetima
2. likvor sakupiti u dvije sterilne epruvete. Jedna se šalje na citološku, a druga na bakteriološku obradu. Ako je uzorka malo, samo jedna epruveta,
   ta se šalje na mikrobiologiju
3. odmah poslati u laboratorij na obradu, ako nije moguće ostaviti u termostatu ili na sobnoj temperaturi

1. prije aspiracije dezinficirati područje kože 70% izopropilnim alkoholom i /ili povidon-jodidom
2. uzeti uzorak perkutanom aspiracijom ili prilikom kirurškog zahvata
3. dobiveni sadržaj staviti u sterilnu posudu s ili bez tekuće hranjive  podloga (bujona)
4. uzorak odmah poslati u laboratorij, ako nije moguće držati na sobnoj temperaturi ili u termostatu.

1. uzorak uzeti suhim ili u fiziološkoj otopini navlaženim brisom
2. obrisati, ne prečvrsto, dno rane i /ili rubove rane, ostaviti otprilike 30 sekundi da  bris upije sadržaj rane
3. postupak ponoviti sa još jednim brisom
4. precizno naznačiti koji je prvi, a koji je drugi bris
5. ako je prisutan sekret u rani, aspirirati sadržaj iglom i brizgaljkom > 1 mL
6. dostaviti u laboratorij unutar 1-2 sata po uzimanju u strerilnoj posudici ili brizgaljki
7. pohrana sadržaja rane ili brisa u transportnoj podlozi moguća do 12 sati pri sobnoj temperaturi (22-25 C)

1. eksudat iz lezije aspirirati iglom i brizgaljkom u količini > 1 mL
2. uzorak odmah zatvoriti „kapicom“ (bez igle) ili staviti u transportnu podlogu
3. ne preporuča se postupak s dva brisa
4. uzorak tkiva se uzima „ punch“ biopsijom sa 3-4 mjesta ili kirurškom biopsijom s dva mjesta ( > 1gr tkiva)
5. bioptat se uzima na granici inficiranog i zdravog tkiva ili iz stijenke abscesa
6. pri fistuli bitno dekontaminirati okolinu lezije, a zatim aspirirati sadržaj s dna lezije ili donje trećine lezije
7. transport unutar 1-2 sata po uzimanju u brizgaljki s „kapicom“ ili u sterilnoj posudici sa ili bez fiziološke otopine
8. transportnu podlogu sa sadržajem i ili tkivom može se pohraniti do 12 sati pri sobnoj temperaturi (22-25 C)

1. uzorak je aspirat iz dubine dobiven punkcijom ili bioptat stijenke abscesa nakon kirurške incizije
2. uzimanje uzoraka, transport i pohrana identični su kao i kod otvorenog abscesa

1. uzorak je aspirat koji se uzima iglom (18-25 gange) i brizgaljkom
2. nakon aspiracije sadržaja navući malo fiziološke otopine u iglu
3. Sadržaj staviti u sterilnu epruvetu
4. hitan transport tijekom 15 minuta, a očekivani izolat u 25-35% slučajeva

1. prije uzimanja uzorka bioptata ili aspirata dekontaminirati ranu
2. učiniti kirurški debridman
3. uzeti bioptat s ruba lezije na granici granulacijskog i nekrotičnog tkiva
4. odmah poslati u laboratorij, ako nije moguće, ostaviti na sobnoj temperaturi

1. bioptate staviti u sterilnu posudu i odmah poslati u laboratorij
2. staviti u transportni bujon, odmah poslati u laboratorij, ako nije moguće ostaviti  u termostat ili na sobnoj temperaturi